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离子交换柱设备层析洗脱操作

点击次数:   更新时间:19/08/20 14:34:08   【关闭分    享:
  离子交换柱设备是将物质中的离子相互交换达到一定的作用,常用于深度脱盐处理,设备进行的是离子交换层析的处理方法,所以它的运行主要多步操作步骤,其中洗脱是其中一个步骤,接下来我们就来看一下这一步是这么操作的。
  离子交换柱设备已结合样品的离子交换前,可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱,也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全,往往需要逐步改变pH或离子强度,其中简单的方法是离子交换柱设备阶段洗脱法,即分次将不同pH与离子强度的溶液加入,使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大,使许多洗脱体积相近的成分同时洗脱,纯度较差,不适宜精细的分离。不错的洗脱方法是连续梯度洗脱。两个容器放于同一水平上,第一个容器盛有一定pH的缓冲液,第二个容器含有高盐浓度或不同pH的缓冲液,两容器连通,第一个容器与柱相连,当溶液由第一容器流入柱时,第二容器中的溶液就会自动来补充,经搅拌与第一容器的溶液相混合,这样流入离子交换柱设备柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。第一容器中任何时间的浓度都可用下式进行计算:
  C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1
  式中A1、A2分别代表两容器的截面;C1、C2分别表示容器中溶液的浓度;V为流出体积对总体积之比。
  当A1=A2时为线性梯度,当A1>A2时为凹形梯度,A1>A2时为凸形梯度。
  洗脱时应满足以下要求:
  1、洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不至于太拥挤。
  2、梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。
  3、梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸,会引起区带扩散;而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
  离子交换柱设备洗脱馏份的分析按一定体积(5-10ml/管)收集的洗脱液可逐管进行测定,绘制出层析图谱。依实验目的的不同,可采用适宜的检测方法(生物活性测定、免疫学测定等)确定图谱中目的物的位置,并回收目的物。
  离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在离子交换柱设备柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生,也可用乙醇洗涤,其顺序为:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定,阳离子交换剂可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些产品建议用0.02%叠氮钠。
  离子交换柱设备进行的层析操作是比较严谨的,所以大家在操作的时候一定要注意把握量的多少,同时观测好反应发生的变化,注重比较容易出错的地方的检测,不要的时候进行二次检测。
小编:fir
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